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    兔elisa檢測試劑盒是如何操作的,操作時又要注意哪些事項?

    發布時間:2022-04-26   點擊次數:90次
      兔elisa檢測試劑盒的實驗原理:
      將兔Ⅰ型膠原α2(COL1α2)抗體包被于96孔微孔板中,制成固相載體,向微孔中分別加入標準品或標本,其中的兔Ⅰ型膠原α2(COL1α2)與連接于固相載體上的抗體結合,然后加入生物素化的兔Ⅰ型膠原α2(COL1α2)抗體,將未結合的生物素化抗體洗凈后,加入HRP標記的親和素,再次徹底洗滌后加入TMB底物顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成黃色。顏色的深淺和樣品中的兔Ⅰ型膠原α2(COL1α2)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(O.D.值),計算樣品濃度。
     
      兔elisa檢測試劑盒的操作步驟:
      1、加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
      2、溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
      3、配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
      4、洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
      5、加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
      6、溫育:操作同3。
      7、洗滌:操作同5。
      8、顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘。
      9、終止:每孔加終止液50μl,終止反應。
      10、測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
     
      注意事項:
      1、試劑準備:準備一次實驗所需要的酶標條,其它的可從微孔板上拆下,密封,按照說明書要求保存,以備下次使用。
      2、加樣:實驗操作中請使用一次性的吸頭,避免交叉污染。加樣時注意不要有氣泡,將樣品加于酶標板底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。加樣或加試劑時,第1個孔與最后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大,將會導致不同的“預溫育”時間,從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。因此,一次加樣時間最好控制在10分鐘內。推薦設置復孔進行實驗。
      3、溫育:為防止樣品蒸發,實驗時請將加上蓋或覆膜的酶標板置于濕盒內,以避免液體蒸發,洗板后應盡快進行下步操作,任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態,同時應嚴格遵守給定的溫育時間和溫度。
      4、洗滌:充分的洗滌非常重要,在每次洗滌過程中,都要將洗滌液完全甩干。洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上拍干,勿將濾紙直接放入反應孔中吸水,同時要消除板底殘留的液體和手指印,避免影響最后的酶標儀讀數。如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
      5、反應時間的控制:加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化,如顏色較深,請提前加入終止液終止反應,避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數。
      6、底物:底物請避光保存,在儲存和溫育時避免強光直接照射。
      7、如果實驗室內濕度低于60%,推薦使用加濕器提高濕度水平。
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