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    微生物elisa檢測試劑盒具體怎么操作,使用時注意啥?

    發布時間:2021-06-25   點擊次數:489次
      微生物elisa檢測試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被大鼠內毒素(ET)elisa試劑盒捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的微生物硫化氫(H2S)ELISA檢測試劑盒呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
     
      微生物elisa檢測試劑盒準備:
     
      試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡后方可使用。
     
      20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。
     
      微生物elisa檢測試劑盒操作步驟:
     
      1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
     
      2.  設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
     
      3.  樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。
     
      4.  除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
     
      5.  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。
     
      6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
     
      7.  每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。
     
      使用注意事項:
     
      1)試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
     
      2)實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
     
      3)不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
     
      4)使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
     
      5)使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
     
      6)洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
     
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